Jiachang Biological - biotechnology services and research and development as one of the high-tech enterprises
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細胞治療産品來(lái)源多樣、生(shēng)物學特性複雜。間充質幹細胞、NK細胞、CAR-T細胞、誘導多功能幹細胞等不同類别細胞治療産品的生(shēng)産過程都(dōu)會涉及細胞的離(lí)體(tǐ)培養。而細胞離(lí)體(tǐ)培養必然會涉及生(shēng)物學屬性的變化、生(shēng)物學安全性改變、外源性污染、交叉污染等問(wèn)題，這些問(wèn)題嚴重影(yǐng)響研發初始到生(shēng)産過程的進展和成功。
根據《細胞治療産品研究與評價技術(shù)指導原則》、《人(rén)源性幹細胞産品藥學研究與評價技術(shù)指導原則（試行）》、《基因修飾細胞治療産品非臨床研究與評價技術(shù)指導原則（試行）》等指南(nán)要求，研究者需建立各類細胞治療産品質量控制策略。質量控制一般應考慮鑒别、生(shēng)物學效力、純度、雜質、細胞數量（活細胞數、功能細胞數等）和一般安全性檢測（如(rú)無菌、支原體(tǐ)、内毒素、外觀、除細胞數之外的其他(tā)外源性異物等）等。同時也要根據細胞治療産品特性，質量研究和檢查應涵蓋細胞特性分(fēn)析、特定病毒和非特定病毒檢測、病毒載體(tǐ)回複突變（複制性病毒檢測）、生(shēng)物學活性（明确産品與臨床治療相(xiàng)關的生(shēng)物學效應和作(zuò)用機(jī)制）等。
珈創生(shēng)物可(kě)提供細胞基因療法（CGT）産品的綜合質量檢測服務。
針對如(rú)間充質幹細胞産品這類非基因編輯細胞治療産品，珈創生(shēng)物可(kě)提供：
1、微生(shēng)物學安全性檢測，建立從(cóng)原輔料、起始原物料（如(rú)生(shēng)産用細胞、菌毒種等）到産品的各方面質量安全控制方案，确保各類細胞及細胞産品滿足無細菌、真菌、支原體(tǐ)、病毒污染，以及無微生(shēng)物代謝産物污染的質量要求；
2、生(shēng)物學安全性檢測，建立風(fēng)險預測或排除細胞治療産品進入人(rén)體(tǐ)後産生(shēng)成瘤性、異常免疫反應、分(fēn)化等安全性問(wèn)題；
3、生(shēng)物學屬性檢測，如(rú)細胞鑒别、活性、純度和均一性等生(shēng)物學屬性評價，降低各類細胞治療産品因其本身(shēn)具有的多樣性、異質性、複雜性等特點帶來(lái)的風(fēng)險；
4、生(shēng)物學有效性檢測，如(rú)誘導分(fēn)化能力、免疫學反應、相(xiàng)關活性物質分(fēn)泌等來(lái)預測臨床治療效應。
針對如(rú)CAR-T細胞這類基因編輯的免疫細胞治療産品，除上述一般性的細胞質量控制檢項外，還(hái)需考慮生(shēng)産質粒的菌種，質粒、慢(màn)病毒以及特殊生(shēng)産工(gōng)藝中引入的其他(tā)風(fēng)險，如(rú)慢(màn)病毒載體(tǐ)回複突變（RCL檢測）、對靶細胞的效應、分(fēn)泌特定因子、工(gōng)藝相(xiàng)關雜質（磁珠等）和産品相(xiàng)關雜質（如(rú)非功能雜細胞群等）檢測等。
珈創生(shēng)物細胞治療産品技術(shù)服務檢測項目總表
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序号 |
類别(産品/項目/參數) |
産品/項目/參數 |
依據的标準（方法）名稱及編号（含年(nián)号） |
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序号 |
名 稱 |
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1 |
細胞鑒别試驗 |
1.1 |
同工(gōng)酶試驗 |
生(shēng)物制品生(shēng)産檢定用動物細胞基質制備及檢定規程《中國(guó)藥典》2020年(nián)版三部， 生(shēng)物制品生(shēng)産檢定用菌毒種管理(lǐ)及質量控制、 生(shēng)物制品生(shēng)産檢定用動物細胞基質制備及質量控制、生(shēng)物制品病毒安全性控制《中國(guó)藥典》2020年(nián)版三部 Code of Federal Regulation Title 9（9 CFR） Guidance for Industry :Characterization and Qualification of Cell Substrates and Other Biological Materials Used in the Production of Viral Vaccines for Infectious Disease Indications |
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1.2 |
染色體(tǐ)核型分(fēn)析法 |
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1.3 |
STR分(fēn)析法 |
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1.4 |
細胞形态觀察法 |
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1.5 |
細胞表面标記物檢測--流式細胞術(shù) |
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1.6 |
DNA條形碼法 |
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1.7 |
種屬鑒定-- PCR法 |
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1.8 |
RAPD法（随機(jī)擴增多态性DNA） |
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2 |
無菌檢查 |
2.1 |
細菌、真菌無菌檢查--薄膜過濾法 |
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2.2 |
細菌、真菌無菌檢查--直接接種法 |
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2.3 |
分(fēn)枝杆菌檢查法 |
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3 |
支原體(tǐ)檢查 |
3.1 |
支原體(tǐ)檢查--瓊脂培養法 |
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3.2 |
支原體(tǐ)檢查--液體(tǐ)培養法 |
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3.3 |
支原體(tǐ)檢查--DNA染色法 |
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4 |
内、外源病毒因子檢查 |
4.1 |
細胞形态觀察及血吸附試驗 |
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4.2 |
體(tǐ)外不同指示細胞接種培養法 |
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4.3 |
動物體(tǐ)内接種法 |
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4.3.1 |
乳鼠腦内及腹腔接種法 |
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4.3.2 |
小鼠腦内及腹腔接種法 |
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4.3.3 |
豚鼠腹腔接種法 |
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4.3.4 |
家兔皮内及皮下接種法 |
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4.4 |
雞胚接種法 |
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4.4.1 |
雞胚卵黃(huáng)囊接種法 |
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4.4.2 |
雞胚尿囊腔接種及尿囊液血凝試驗 |
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4.5.1 |
逆轉錄病毒檢測--逆轉錄酶活性測定法 |
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4.5.2 |
逆轉錄病毒檢測--透射電鏡觀察法 |
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4.5.3 |
逆轉錄病毒檢測--感染性試驗 |
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4.5.4 |
逆轉錄病毒樣顆粒定量--透射電鏡法 |
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4.5.5 |
逆轉錄病毒樣顆粒定量--Q-PCR法 |
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4.6.1 |
鼠源性病毒檢測--細胞試驗 |
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4.6.2 |
鼠源性病毒檢測--動物抗體(tǐ)産生(shēng)試驗 |
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4.6.3 |
鼠源性病毒檢測--雞胚感染試驗 |
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4.6.4 |
鼠源性病毒檢測--Q-PCR法 |
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4.7.1 |
人(rén)源病毒檢測--免疫熒光(guāng)法 |
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4.7.2 |
人(rén)源病毒檢測--Q-PCR法 |
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4.8.1 |
牛源性病毒檢測--細胞培養法 |
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4.8.2 |
牛源性病毒檢測--熒光(guāng)抗體(tǐ)檢測法 |
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4.8.3 |
牛源性病毒檢測--Q-PCR法 |
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4.9.1 |
鼠細小病毒檢測--細胞培養法 |
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4.9.2 |
鼠細小病毒檢測--Q-PCR法 |
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4.10.1 |
豬源性病毒檢測--細胞培養法 |
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4.10.2 |
豬源性病毒檢測--熒光(guāng)抗體(tǐ)檢測法 |
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4.10.3 |
豬源性病毒檢測--Q- PCR法 |
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4.11.1 |
杯狀病毒（Vesivirus 2117）檢測--Q- PCR法 |
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5 |
成瘤性檢查 |
5.1 |
動物體(tǐ)内接種法 |
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5.2 |
軟瓊脂克隆形成試驗 |
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5.3 |
端粒酶活性檢測--Q-PCR法 |
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6 |
緻瘤性檢查 |
6.1 |
動物體(tǐ)内接種法 |
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7 |
免疫學反應檢測 |
7.1 |
淋巴細胞增殖抑制試驗 |
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7.2 |
特定淋巴細胞亞群檢測法（Th1,Th17,Treg） |
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7.3 |
淋巴細胞分(fēn)泌TNF-α抑制試驗 |
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8 |
生(shēng)物學有效性評價 |
8.1 |
成骨細胞分(fēn)化試驗 |
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8.2 |
成軟骨細胞分(fēn)化試驗 |
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8.3 |
成脂細胞分(fēn)化試驗 |
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9 |
細胞活性檢測 |
9.1 |
細胞計(jì)數和細胞存活率檢測法 |
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9.2 |
細胞生(shēng)長曲線測定法 |
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9.3 |
細胞周期測定--PI染色法 |
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10 |
殘留物檢測 |
10.1 |
牛血清白(bái)蛋白(bái)殘留檢測法 |
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10.2 |
抗生(shēng)素殘留檢測--培養法 |
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10.3 |
抗生(shēng)素殘留檢測--酶聯免疫法 |
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10.4 |
磁珠殘留 |
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10.5 |
Human IL-2殘留 |
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11 |
噬菌體(tǐ)污染檢查 |
11.1 |
透射電鏡觀察--負染色法 |
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11.2 |
培養觀察--噬斑法 |
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12 |
菌種鑒定 |
12.1 |
菌株染色觀察--普通染色法 |
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12.2 |
菌株染色觀察--革蘭氏染色法 |
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12.3 |
菌落形态觀察-培養法 |
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12.4 |
菌株抗生(shēng)素抗性試驗-培養法 |
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12.5 |
菌株生(shēng)化特征分(fēn)析--生(shēng)化反應試驗 |
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12.6 |
16SrRNA分(fēn)析法 |
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12.7 |
18SrRNA分(fēn)析法 |
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12.8 |
26SrRNA分(fēn)析法 |
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12.9 |
ITS序列分(fēn)析法 |
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13 |
細菌内毒素檢測 |
13.1 |
凝膠法 |
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14 |
可(kě)複制型病毒檢測 |
14.1 |
複制性逆轉錄病毒檢測--細胞培養和 Q- PCR法 |
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14.2 |
複制性慢(màn)病毒檢測--細胞培養和 Q- PCR/ELISA法 |
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15 |
細胞制劑檢測 |
CAR+T細胞比例 CD3+細胞比例 生(shēng)物學活性 磁珠殘留 Human IL-2殘留 NK細胞自(zì)然殺傷活性檢測 NK細胞ADCC功能檢測 NK激活性和抑制性受體(tǐ)檢測GzmB,perforin,CD107表達水平檢測 |
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16 |
其他(tā)檢測項目 |
流式細胞術(shù)的絕對細胞計(jì)數方法 CCK-8法則定細胞群體(tǐ)倍增時間 細胞克隆形成率檢測方法 MSC急性毒性及抗GVHD效果評價 基于RPA-cas技術(shù)的口腔支原體(tǐ)檢測 基于LAMP技術(shù)的肺炎支原體(tǐ)的可(kě)視化檢測 Lb-cas12a蛋白(bái)的原核表達及純化 基于CRISPRCas系統的多種支原體(tǐ)核酸檢測 mRNA含量ribogreen熒光(guāng)檢測 mRNA疫苗總抗體(tǐ)滴度ELISA檢測法 mRNA疫苗中和抗體(tǐ)效價假病毒中和試驗檢測法 dsRNA雜質ELISA檢測法 馬源性病毒檢查（3種） 禽源性病毒檢查（3種） 昆蟲細胞CO1條形碼分(fēn)析法 昆蟲細胞螺原體(tǐ)qPCR檢測 昆蟲杆狀病毒檢測 昆蟲黃(huáng)病毒檢測 昆蟲諾達病毒檢測 昆蟲彈狀病毒（内源性/外源性）檢測 SV40大(dà)T抗原核酸序列檢測 腺病毒5型EIA基因檢測 胎畸瘤形成試驗 |
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