珈創生(shēng)物 —— 生(shēng)物技術(shù)服務與研發爲一體(tǐ)的高新技術(shù)企業
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發布時間：2022-06-14 17:25 信息來(lái)源： 閱讀(dú)次數： 次
那麽……你(nǐ)是不是有許多問(wèn)号？
爲什麽要進行細胞系鑒定
細胞是生(shēng)産抗體(tǐ)、蛋白(bái)藥物、疫苗的“母體(tǐ)”，也是進行細胞治療、基因治療的基礎。細胞的質量優劣、特性穩定與否、種屬差異程度的影(yǐng)響貫穿生(shēng)物制品的研發、生(shēng)産及臨床應用的全過程。
如(rú)因使用了交叉污染或錯誤辨識的細胞會導緻研究結論錯誤、結果不可(kě)重複、臨床細胞治療失敗等，給研究者、藥品生(shēng)産者等帶來(lái)不可(kě)估量的損失，甚而威脅到患者的生(shēng)命健康。
爲此，各種雜志如(rú)Nature、Science、Cell等曾多次發出呼籲，要求研究者對細胞進行鑒定。
相(xiàng)關法規要求
《中國(guó)藥典》2020年(nián)版：新建細胞系/株、細胞庫（ MCB 和 WCB）和生(shēng)産終末細胞應進行鑒别試驗，以确認爲本細胞，且無其他(tā)細胞的交叉污染。
ICH Q5D 用于生(shēng)物技術(shù)産品及生(shēng)物制品生(shēng)産的細胞基質的來(lái)源和鑒定：應采用合适的試驗證明建庫的細胞就(jiù)是它本身(shēn)。鑒别試驗可(kě)利用細胞的表型或遺傳型特征，但(dàn)不必作(zuò)所有的試驗。通常對MCB作(zuò)鑒别試驗，而對每個WCB僅作(zuò)有限的鑒别試驗。
什麽時候需進行細胞系鑒定
1
當建立或獲得(de)一個新的細胞系時；
2
使用細胞進行臨床治療（試驗）前；
3
研究項目或生(shēng)産過程涉及到細胞試驗，在其開始/結束時；
4
在細胞凍存之前，或細胞已連續培養 2～3 個月時；
5
發表文章(zhāng)或申請(qǐng)課題經費前；
6
細胞系表現不穩定或結果與預期差别較大(dà)時；
7
當實驗室使用超過一種細胞系時，所有細胞系最好先鑒定以排除交叉污染的可(kě)能。
細胞系鑒定的方法
細胞培養中可(kě)以使用許多方法對交叉污染進行鑒定，藥典規定應至少選擇下述一種或幾種方法對細胞進行種屬和細胞株間及專屬特性的鑒别。
1
細胞形态觀察
通過觀察細胞形态，初步判斷細胞生(shēng)物屬性，如(rú)細胞生(shēng)長狀态等，以下爲常見(jiàn)的幾種細胞形态：
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2
STR鑒定
STR（Short Tandem Repeat，短(duǎn)串聯重複序列） 基因位點由長度爲 3~7 個堿基對的短(duǎn)串聯重複序列組成，這些重複序列廣泛存在于人(rén)類基因組中，可(kě)作(zuò)爲高度多态性标記，被稱爲細胞的 DNA 指紋，其可(kě)通過一定的計(jì)算方法，即可(kě)根據所得(de)的 STR 分(fēn)型結果與專業的細胞 STR 數據庫比對，從(cóng)而推算出樣品所屬的細胞系或可(kě)能的交叉污染的細胞系名稱。
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3
同工(gōng)酶
同工(gōng)酶(isoenzyme)是指蛋白(bái)的分(fēn)子結構、理(lǐ)化性質乃至免疫學性質不同，但(dàn)是催化的化學反應相(xiàng)同的一組酶。這類酶存在于生(shēng)物的同一種屬或同一個體(tǐ)的不同組織、甚至是不同的細胞中。
同工(gōng)酶的結構差異在一定條件(jiàn)下能在電泳上區分(fēn)出來(lái)，常用于細胞系種屬鑒定，通常以乳酸脫氫酶（LD）、嘌呤核苷磷酸化酶（NP）、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）、蘋果酸脫氫酶（MD）等幾種酶譜爲常用分(fēn)析指标。
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4
染色體(tǐ)核型分(fēn)析
染色體(tǐ)核型分(fēn)析是以分(fēn)裂中期的染色體(tǐ)爲研究對象，根據染色體(tǐ)的長度、着絲點位置、長短(duǎn)臂比例、随體(tǐ)的有無等特征，并借助顯帶技術(shù)對染色體(tǐ)進行分(fēn)析、比較、排序和編号，根據染色體(tǐ)結構和數目的情況來(lái)進行鑒别。核型分(fēn)析可(kě)以爲細胞遺傳分(fēn)類、物種間親緣的關系以及染色體(tǐ)數目和結構變異的研究提供重要依據。
顯帶技術(shù)指通過特殊的染色方法使染色體(tǐ)的不同區域着色，使染色體(tǐ)在光(guāng)鏡下呈現出明暗相(xiàng)間的帶紋。常用的三大(dà)顯帶技術(shù)包括：G顯帶、Q顯帶和R顯帶。其中，G顯帶運用最廣泛，指标本經胰蛋白(bái)酶處理(lǐ)後，應用Giemsa染色，随後鏡檢、分(fēn)析；R顯帶（R-bandin）指中期染色體(tǐ)不經鹽酸水解或不經胰酶處理(lǐ)的情況下，經Giemsa染色，所呈現的是與G顯帶着色相(xiàng)反的情況，故又稱反帶；Q顯帶，指熒光(guāng)顯帶，同G顯帶帶紋。
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5
DNA指紋圖譜
DNA 指紋圖譜技術(shù)（DNA-Fingerprinting）由英國(guó)科(kē)學家 Jeffreys 于 1986 年(nián)開發，是具有完全個體(tǐ)特異的DNA多态性圖譜，其個體(tǐ)識别能力足以與手指指紋相(xiàng)媲美，因而得(de)名。DNA 指紋圖譜技術(shù)具有快(kuài)速、準确等優點，是鑒别品種、品系的有力工(gōng)具，已廣泛應用于很多作(zuò)物的品種資源多樣性和純度鑒定研究。
其中SSR(simple sequence repeat)和SNP（single nucleotide polymorphism）分(fēn)子标記已被國(guó)際植物新品種權保護聯盟(UPOV)BMT分(fēn)子測試指南(nán)和國(guó)内《植物品種鑒定DNA指紋方法總則》（NY/T2594-2016）定爲優先推薦的兩種标記方法。
相(xiàng)較于傳統的分(fēn)子标記，SNPs在基因組中更豐富，具有數量大(dà)、基因組分(fēn)布廣、穩定性和遺傳力高、鑒定簡單等優點，可(kě)用于快(kuài)速、高通量的基因分(fēn)型分(fēn)析。構建基于SNP标記技術(shù)的DNA指紋圖譜對于品種特異性和真實性鑒别具有重要意義。
6
DNA條形碼技術(shù)
DNA條形碼分(fēn)子鑒定法是利用基因組中一段公認的、相(xiàng)對較短(duǎn)的DNA序列來(lái)進行物種鑒定的一種分(fēn)子生(shēng)物學技術(shù)。由加拿大(dà)動物學家Paul Hebert首次提出，其團隊對動物界包括脊椎動物和無脊椎動物共11門(mén)13320個物種的細胞色素C氧化酶I基因（cytochrome Coxidase I gene）基因序列比較分(fēn)析，發現98%的物種遺傳距離(lí)差異在種内0%-2%，種間平均可(kě)達到11.3%，據此提出可(kě)以用單一的小片段基因來(lái)代表物種。
由于細胞色素C氧化酶I基因（cytochrome Coxidase I gene）和細胞色素B線粒體(tǐ)基因序列在種屬内高度保守，而在種屬間差異較大(dà)，針對不同種屬設計(jì)特異性引物，每一個種屬都(dōu)能擴增出一個特定大(dà)小的片段。可(kě)采用瓊脂糖凝膠電泳方法檢測擴增産物，并進一步測序，以此作(zuò)爲細胞種屬鑒别和交叉污染檢測的的依據。
DNA條形碼技術(shù)具有檢測樣本範圍大(dà)、準确性高、可(kě)快(kuài)速鑒定大(dà)量樣本等優點，是傳統形态鑒别方法的有效補充。
珈創生(shēng)物細胞檢定相(xiàng)關服務
金華海孚生物技術有限公司，創建于2011年(nián)，是一家集生(shēng)物技術(shù)服務與研發爲一體(tǐ)的高新技術(shù)企業，專注于爲生(shēng)物藥品/制品的生(shēng)産企業及研發機(jī)構提供各類細胞（含重組細胞、幹細胞、免疫細胞等）及原輔料的質量檢測、病毒清除工(gōng)藝驗證技術(shù)服務。
行業認可(kě)：累計(jì)成功服務500餘家企業，提供數萬批次的細胞及産品檢測、病毒清除工(gōng)藝驗證技術(shù)服務。
檢項全面：可(kě)提供滿足《中國(guó)藥典，三部，2020版》、《美國(guó)藥典 USP43》、ICH指導原則及相(xiàng)關法律法規要求的樣品檢測，提供一站(zhàn)式技術(shù)服務。
資質健全：擁有本領域的CMA和CNAS資質，并通過了生(shēng)物安全實驗室備案、質量管理(lǐ)體(tǐ)系認證（ISO9001:2015）、環境管理(lǐ)體(tǐ)系認證（ISO14001：2015）、職業健康安全管理(lǐ)體(tǐ)系認證（OHSAS18001:2007）。
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