Regulations and method validation requirements for rapid sterility test methods

發布時間：2023-09-20 15:58 信息來(lái)源：閱讀(dú)次數：次

無菌檢查法系用于檢查藥典要求無菌的藥品、生(shēng)物制品、醫療器械、原料、輔料及其他(tā)品種是否無菌的一種方法。2020版中國(guó)藥典—《1101無菌檢查法》指出，無菌檢查包括薄膜過濾法和直接接種法，隻要供試品性質允許，應采用薄膜過濾法。生(shēng)物制品生(shēng)産工(gōng)藝、組成成分(fēn)複雜，一般不能夠進行終端滅菌，因此，對生(shēng)物制品進行嚴格的質量控制，是降低制品中外源因子或有毒雜質污染風(fēng)險，保證生(shēng)物制品安全有效的必要措施。

無菌檢查法實際包含3個部分(fēn)的實驗，分(fēn)别爲：培養基适用性檢查、方法适用性試驗和供試品的無菌檢查。

培養基适用性檢查主要目的有兩個，一是确認使用的培養基本身(shēn)是無菌的，二是确認使用的培養基細菌或真菌是可(kě)以生(shēng)長并且在規定時間内可(kě)以被觀察到，即靈敏性檢查。方法适用性試驗主要目的是判斷采用的方法，薄膜過濾法或者直接接種法，是否适用于要檢測的這種産品，方法适用性試驗可(kě)以與供試品的無菌檢查同時進行。藥典中從(cóng)檢測數量、檢驗量、陰/陽性對照(zhào)、接種要求、培養觀察和結果判讀(dú)全都(dōu)進行了細緻規定。關于無菌檢查法，美國(guó)、日(rì)本、歐洲藥典等基本實現藥典協調，這裡(lǐ)重點對比中美法規對于供試品的無菌檢測要求差異。

随着新型生(shēng)物制品的湧出，細胞制品的普及，無菌檢查提出了新要求。傳統培養方法因爲至少需要14天的培養時間才可(kě)以出結果，因此在時效性上無法滿足這些生(shēng)物制品的放(fàng)行檢需求，也包括原物料的質檢需求。

關于無菌檢測替代方法的法規要求

laws and regulations

2020年(nián)版《中國(guó)藥典》第四部通則9201，藥品微生(shēng)物檢驗替代方法驗證指導原則提出，随着微生(shēng)物學的迅速發展，制藥領域不斷引入了一些新的微生(shēng)物檢驗技術(shù)，大(dà)體(tǐ)可(kě)分(fēn)爲三類：

① 基于微生(shēng)物生(shēng)長信息的檢驗技術(shù)，如(rú)生(shēng)物發光(guāng)技術(shù)、電化學技術(shù)、比濁法等；

② 直接測定被測介質中活微生(shēng)物的檢驗技術(shù)，如(rú)固相(xiàng)細胞計(jì)數法、流式細胞計(jì)數法等；

③ 基于微生(shēng)物細胞所含有特定組成成分(fēn)的分(fēn)析技術(shù)，如(rú)脂肪酸測定技術(shù)、核酸擴增技術(shù)、基因指紋分(fēn)析技術(shù)等。

《CAR-T細胞治療産品質量控制檢測研究及非臨床研究考慮要點》中提到，在可(kě)行的情況下，首選藥典方法用于無菌檢測，但(dàn)考慮到Car-T細胞産品的特殊性，也鼓勵研究者開發快(kuài)速的無菌檢測法，但(dàn)應與藥典方法平行進行，在獲得(de)充分(fēn)的比對數據後，結合無菌生(shēng)産全過程的風(fēng)險評估設計(jì)放(fàng)行策略，才有可(kě)能替代藥典方法。

USP<1071>Rapid microbial tests for release of sterile short-life products a risk-based aproach介紹了有效期較短(duǎn)的無菌産品放(fàng)行的快(kuài)速微生(shēng)物測試方法，包括ATP生(shēng)物發光(guāng)法、核酸擴增法、流式等，并詳細闡述了這些替代方法的特點。

EP 2.6.21 Nucleic acid amplification techniques介紹了核酸擴增法可(kě)作(zuò)爲替代方法，并詳細闡述了該方法作(zuò)爲替代法需驗證的性能。

核酸qPCR方法适用範圍廣，具有靈敏度高、特異性強、檢測時間短(duǎn)等特點，被廣泛應用于基因工(gōng)程藥物的相(xiàng)關檢驗中。武漢珈創生(shēng)物通過對樣本處理(lǐ)方法和相(xiàng)關的qPCR檢測方法進行充分(fēn)驗證，獨立開發了基于熒光(guāng)探針qPCR方法的細菌/真菌快(kuài)速檢測方法，經驗證，該試劑盒與藥典方法具有可(kě)比性。

武漢珈創生(shēng)物—細菌/真菌快(kuài)速檢測試劑盒

CANVEST qPCR Detection Kit

CANVEST® 細菌 qPCR 檢測試劑盒采用熒光(guāng)探針 qPCR 技術(shù)，用于定性檢測細胞、細胞及基因治療産品以及其他(tā)生(shēng)物制品中是否有細菌的污染。

本試劑盒中的引物探針可(kě)以對多種細菌（覆蓋200種以上常見(jiàn)病原菌）進行特異性檢測，與真菌、支原體(tǐ)、昆蟲、人(rén)類及動物細胞（豬源細胞除外）不存在交叉反應。本試劑盒參照(zhào)中國(guó)藥典 qPCR 方法檢測相(xiàng)關要求進行驗證，檢測限爲100 CFU/mL。試劑盒中加入了内部控制系統，内部控制對照(zhào)（IC）可(kě)在 PCR 擴增反應階段加入，以判斷待檢樣本對擴增反應是否存在抑制；也可(kě)在樣本提取階段加入，作(zuò)爲實驗整體(tǐ)對照(zhào)，同時監測提取得(de)率以及樣本中可(kě)能存在的 PCR 抑制情況。操作(zuò)步驟簡單，可(kě)批量操作(zuò)。

CANVEST® 真菌 qPCR 檢測試劑盒主要适用于效期短(duǎn)、批量小，無法保證在産品使用前完成放(fàng)行檢查的細胞類制品，也可(kě)用于檢測主細胞庫、工(gōng)作(zuò)細胞庫、病毒種子批是否有常見(jiàn)病原性真菌的污染。

本試劑盒中的引物探針可(kě)以對多種緻病性真菌進行特異性檢測，與原核基因組、人(rén)等哺乳類動物基因組不存在交叉反應，其核酸檢測限爲 1-5genome copies/reaction，同時參照(zhào)《中國(guó)藥典》(ChP 9201)、《歐洲藥典》（EP 5.1.6）和《美國(guó)藥典》(UPS 1223) ，從(cóng)專屬性、檢測性、等效性、重現性和耐用性等 5 個方面進行了全面的驗證。操作(zuò)簡單快(kuài)捷，樣本丢失率低，還(hái)可(kě)降低試劑和操作(zuò)過程中存在的污染風(fēng)險

快(kuài)速微生(shēng)物檢測的相(xiàng)關法規

laws and regulations

美國(guó)藥典-USP<1071>RAPID MICROBIAL TESTS FOR RELEASE OF STERILE SHORT-LIFE PRODUCTS A RISK-BASED APPROACH(無菌短(duǎn)貨架期産品放(fàng)行的快(kuài)速微生(shēng)物檢查法: 依據風(fēng)險評估的方法)
美國(guó)藥典-USP<1223>VALIDATION OF ALTERNATIVE MICROBIOLOGICAL METHODS(微生(shēng)物替代方法驗證）
PDA TR33（中英文）-2013 可(kě)選擇的和快(kuài)速的微生(shēng)物檢測方法的評價驗證與執行
美國(guó)藥典-USP [71] STERILITY TESTS無菌檢查
中國(guó)藥典—1101無菌檢查法
中國(guó)藥典—9201藥品微生(shēng)物檢驗替代方法驗證指導原則
歐洲藥典EP.2.6.27 Microbiological Examination of Cell-based preparations (9.2)
CAR-T 細胞治療産品質量控制檢測研究及非臨床研究考慮要點
細胞類制品微生(shēng)物檢查法草案拟公示稿

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