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幹貨 | qPCR 實驗中關于 CT 值問(wèn)題的詳細攻略(中)

發布時間:2019-11-08 13:55 信息來(lái)源: 閱讀(dú)次數:

NTC(無模闆陰性對照(zhào))出現 CT 值,目的基因的 CT 值還(hái)能使用嗎(ma)?


NTC(無模闆陰性對照(zhào))出現擴增一般會有兩種情況:


(1)通過觀察融解曲線,NTC 與目的基因融解曲線峰形不重疊。一般 NTC 的 Tm 值較目的基因 Tm 值小。


image.png


這種情況下,NTC 的 C值是由引物二聚體(tǐ)造成的,并不影(yǐng)響目的基因 C值的采集。


(2)NTC 與目的基因融解曲線峰形重疊。NTC 的 Tm 值等于目的基因的 Tm 值。


image.png


這種情況下,說(shuō)明體(tǐ)系已被氣溶膠污染了。那麽,體(tǐ)系被污染,目的基因的 C值還(hái)能正常使用嗎(ma)?


需要計(jì)算目的基因的 C值與 NTC 的 C值的差值(△CT)來(lái)判定。


若 △C≥ 5,說(shuō)明氣溶膠帶來(lái)的污染對體(tǐ)系影(yǐng)響非常小,可(kě)以忽略不計(jì)。


如(rú)果達不到 △C≥ 5 的程度,△C≥ 3 也可(kě)以認爲氣溶膠的污染程度很低,目的基因的 C值可(kě)正常使用。


若 △C< 3,說(shuō)明污染已經很嚴重了,目的基因的 C值是不能使用的。


未完待續...

轉自(zì):諾唯贊