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發布時間:2019-11-08 13:55 信息來(lái)源: 閱讀(dú)次數: 次
NTC(無模闆陰性對照(zhào))出現 CT 值,目的基因的 CT 值還(hái)能使用嗎(ma)?
NTC(無模闆陰性對照(zhào))出現擴增一般會有兩種情況:
(1)通過觀察融解曲線,NTC 與目的基因融解曲線峰形不重疊。一般 NTC 的 Tm 值較目的基因 Tm 值小。
這種情況下,NTC 的 CT 值是由引物二聚體(tǐ)造成的,并不影(yǐng)響目的基因 CT 值的采集。
(2)NTC 與目的基因融解曲線峰形重疊。NTC 的 Tm 值等于目的基因的 Tm 值。
這種情況下,說(shuō)明體(tǐ)系已被氣溶膠污染了。那麽,體(tǐ)系被污染,目的基因的 CT 值還(hái)能正常使用嗎(ma)?
需要計(jì)算目的基因的 CT 值與 NTC 的 CT 值的差值(△CT)來(lái)判定。
若 △CT ≥ 5,說(shuō)明氣溶膠帶來(lái)的污染對體(tǐ)系影(yǐng)響非常小,可(kě)以忽略不計(jì)。
如(rú)果達不到 △CT ≥ 5 的程度,△CT ≥ 3 也可(kě)以認爲氣溶膠的污染程度很低,目的基因的 CT 值可(kě)正常使用。
若 △CT < 3,說(shuō)明污染已經很嚴重了,目的基因的 CT 值是不能使用的。
未完待續...
轉自(zì):諾唯贊