幹貨丨支原體(tǐ)NAT（Q-PCR）快(kuài)速檢測方法的驗證

2020版中國(guó)藥典（ChP）雖然并未收錄NAT法作(zuò)爲支原體(tǐ)檢測方法，但(dàn)其中也提到了“也可(kě)采用經國(guó)家藥品檢定機(jī)構認可(kě)的其他(tā)方法”。傳統的培養法和DNA染色法雖然有着自(zì)身(shēn)的優點，但(dàn)較長的檢測周期和較大(dà)的樣品檢測用量逐漸不能滿足行業快(kuài)速發展的需求。NAT方法從(cóng)當前支原體(tǐ)快(kuài)速檢測方法中脫穎而出，已經被美國(guó)藥典、歐洲藥典和日(rì)本藥典收錄，并明确提到NAT方法在經過适當驗證後，可(kě)用于檢測方法補充或替代藥典方法進行放(fàng)行檢測。

下表爲傳統的支原體(tǐ)檢測方法單次檢測對應樣品量和檢測周期：

相(xiàng)對于傳統方法，Q-PCR方法隻需要很少的樣品量（視靈敏度調整，按USP示例，最少可(kě)爲0.2ml），若結果爲陰性最快(kuài)可(kě)以在24h内彙報結果。但(dàn)是容易受到其他(tā)因素幹擾導緻出現“假陽性、假陰性”結果，所以針對該方法的驗證工(gōng)作(zuò)極爲重要。NMPA于2017年(nián)發布了《細胞治療産品研究與評價技術(shù)指導原則》，提出可(kě)以采用快(kuài)速、微量的新型檢測方法。研究者應對新型檢驗方法與傳統檢測方法進行比較和評估，必要時，在産品放(fàng)行檢驗時可(kě)以采用兩種檢驗方法進行相(xiàng)互驗證。

對于如(rú)何進行NAT方法的驗證，目前歐洲藥典<2.6.7>和日(rì)本藥典裡(lǐ)都(dōu)詳細介紹，其内容基本一緻。中檢院也發表了文章(zhāng)《支原體(tǐ)檢查的核酸檢測方法及方法學驗證的思考》，以期對我國(guó)支原體(tǐ)核酸擴增法檢測的研發者及使用者提供借鑒。支原體(tǐ)NAT法須進行專屬性（Specificity）、檢測限（Detection Limit）和耐用性（Robustness）驗證。

● 2020版中國(guó)藥典三部《生(shēng)物制品生(shēng)産檢定用動物細胞基質制備及質量控制》中提出對于生(shēng)産用細胞，需要對主細胞庫（MCB）、工(gōng)作(zuò)細胞庫（WCB）、生(shēng)産終末細胞（EOPC）進行支原體(tǐ)檢查；通則9201 藥品微生(shēng)物檢驗替代方法驗證指導原則

● 《免疫細胞治療産品藥學研究與評價技術(shù)指導原則（試行）》中建議(yì)在關鍵時間點對适合的中間樣品開展支原體(tǐ)等安全性相(xiàng)關檢測或采取相(xiàng)關的措施加以控制，并且支原體(tǐ)同樣需要作(zuò)爲終産品的放(fàng)行檢項

● FDA,Guidance for Industry:Characterization and Qualification of Cell Substrates and Other Biological Materials Used in the Production of Viral Vaccines for Infectious Disease Indications，中提出對于原材料、病毒種子、未加工(gōng)的收獲液等都(dōu)需要進行支原體(tǐ)控制

●  EP 10.0 2.6.7 Validation of nucleic acid amplificationtechniques (NAT) for the detection of mycoplasmas: guidelines