珈創生(shēng)物 —— 生(shēng)物技術(shù)服務與研發爲一體(tǐ)的高新技術(shù)企業
優質高效透明
High quality, efficient and transparent
1、服務信息（簡介）
珈創生(shēng)物病毒清除工(gōng)藝驗證技術(shù)服務，爲客戶提供定制的病毒清除工(gōng)藝驗證服務，通過 Q-PCR 或感染性實驗對工(gōng)藝處理(lǐ)前後樣品進行病毒檢測和滴度分(fēn)析，驗證客戶下遊工(gōng)藝對病毒的去(qù)除/滅活效果。
珈創生(shēng)物擁有經過國(guó)家法檢認定的 BSL-2 實驗室，珈創生(shēng)物病毒清除工(gōng)藝驗證具備CMA及CNAS雙認證；實驗室配套多台生(shēng)物安全櫃、AKTA 純化儀、納濾過濾設備、超速離(lí)心機(jī)等設備，可(kě)開展低 pH 孵育、熱(rè)處理(lǐ)/巴氏消毒、S/D 處理(lǐ)、柱層析（親和層析、陰離(lí)子交換層析和疏水層析等）和納米膜過濾等多種工(gōng)藝的病毒清除工(gōng)藝驗證。行業經驗豐富，累計(jì)完成數百起病毒清除工(gōng)藝驗證項目。
珈創生(shēng)物病毒清除工(gōng)藝驗證平台團隊負責人(rén)爲武漢大(dà)學微生(shēng)物學博士，具備豐富的病毒學、細胞生(shēng)物學和微生(shēng)物學基礎和科(kē)研經曆，多年(nián)專注于細胞檢測和病毒清除工(gōng)藝驗證項目開展和優化。專業團隊擁有十年(nián)以上的從(cóng)業經驗，通過不斷優化技術(shù)體(tǐ)系，提高指示病毒滴度和純度以滿足法規和客戶的需求。團隊核心成員(yuán)具有紮實的生(shēng)物醫學、藥學等相(xiàng)關專業背景，具備5 年(nián)以上的病毒清除工(gōng)藝驗證從(cóng)業經驗。
近年(nián)來(lái)，珈創生(shēng)物已向國(guó)内數百家生(shēng)物藥企業提供國(guó)内外病毒清除工(gōng)藝驗證技術(shù)服務，兼顧國(guó)内與國(guó)外的法規要求差異，根據客戶需求，提供全面合理(lǐ)的驗證方案，并提供權威的檢測報告，爲企業在工(gōng)藝開發、新藥臨床試驗申報（IND）及生(shēng)物制品許可(kě)申請(qǐng)（BLA）保駕護航，取得(de)了良好的社會效益和經濟效益。
2、法規依據
《生(shēng)物制品病毒安全性控制》中華人(rén)民(mín)共和國(guó)藥典，2020年(nián)版，三部，生(shēng)物制品通則
《血液制品去(qù)除/滅活病毒技術(shù)方法及驗證指導原則》國(guó)藥監注[2002]160号
《生(shēng)物組織提取制品和真核細胞表達制品的病毒安全性評價技術(shù)審評一般原則》國(guó)家食品藥品監督管理(lǐ)局編号：[S]GPH3-1，2005 年(nián) 12 月
《動物源性醫療器械病毒滅活/去(qù)除有效性驗證的原則》國(guó)家食品藥品監督管理(lǐ)局關于發布動物源性醫療器械注冊技術(shù)審查指導原則的通告（2017 年(nián)第 224 号）
Viral Safety Evaluation of Biotechnology Products Derived From Cell Lines of Human or Animal Origin. 1999. ICH Q5A（R1）
Design, Evaluation, and Characterization of Viral Clearance Procedure.2016. USP General Chapter: <1050.1>
3、 指示病毒選擇
指示病毒可(kě)分(fēn)爲“相(xiàng)關”病毒（如(rú)人(rén)血液制品可(kě)能攜帶的人(rén)類病毒 HAV、HBV、HIV 和 B19 等）、特異“模型”病毒（如(rú) CHO 表達系統的 MVM、x-MuLV 病毒，杆狀病毒表達系統的 BV 病毒等）和非特異“模型”病毒（如(rú) CHO 表達系統的 PRV 和 Reo3 病毒）三類，應優先選擇與潛在污染病毒密切相(xiàng)關的病毒，如(rú)相(xiàng)關病毒不能獲取或不适于體(tǐ)外培養，可(kě)采用特異“模型”病毒代替。
評價病毒清除的總能力時，應選擇具有不同特性的非特異性模型病毒，包括 DNA/RNA、有/無包膜、顆粒大(dà)小、尤其對物理(lǐ)/化學處理(lǐ)明顯耐受的病毒等指示病毒需有足夠高的滴度，同時所選指示病毒不能對操作(zuò)人(rén)員(yuán)和環境造成生(shēng)物危害。
驗證平台擁有豐富的病毒毒種毒株，且背景清楚，純度高，滴度可(kě)達 8~9Log10/ml。表 1 列出了 CHO 表達制品工(gōng)藝驗證最常用四種指示病毒：
表 1 病毒清除工(gōng)藝驗證中常用指示病毒性質
| 病毒名稱 |
病毒特性 |
檢測方法 |
病毒滴度 Log10/ml |
|
Reo3（呼腸孤病毒） |
雙鏈 RNA 病毒，無包膜，抗性中50-70nm |
TCID50 Q-PCR |
8-9 |
|
MVM（鼠細小病毒 ） |
單鏈 DNA 病毒無包膜，抗性極高
18-26nm
|
TCID50 Q-PCR |
8.5-9.5 |
| PRV(僞狂病毒) | 雙鏈 DNA 病毒有包膜，抗性中120-200nm |
TCID50 Q-PCR |
8-9 |
|
MuLv （鼠白(bái)血病病毒） |
單鏈 RNA 病毒有包膜，抗性低 80-120nm |
TCID50 Q-PCR |
7.5-8.5 |
|
BV (杆狀病毒) |
雙鏈 DNA病毒有包膜 45×275nm |
TCID50 |
8-9 |
|
POL-1 (人(rén)脊髓灰質炎I型病毒) |
單鏈 RNA 病毒無包膜，抗性中 25-30nm |
TCID50 |
8-9 |
|
VSV (水疱性口炎病毒) |
單鏈 RNA 病毒有包膜，抗性低 70×150nm |
TCID50 Q-PCR |
8-9 |
|
PPV （豬細小病毒） |
單鏈 DNA 病毒無包膜，抗性高 18-24nm |
TCID50 Q-PCR |
7.5-8.5 |
|
HAdV-5
(人(rén)腺病毒5型) |
雙鏈 DNA 病毒無包膜，抗性低
70-90nm |
TCID50 |
8.5-9.5 |
|
BPIV-3 （牛副流感病毒3型） |
單鏈 RNA 病毒有包膜，抗性低 150-200nm |
TCID50 |
8-9 |
4、病毒清除工(gōng)藝驗證方案
2020 年(nián) 1 月 21 日(rì)，國(guó)家藥品監督管理(lǐ)局（簡稱：NMPA）發布 “國(guó)家藥監局關于适用《Q2（R1）：分(fēn)析方法論證：正文和方法學》 等 11 個國(guó)際人(rén)用藥品注冊技術(shù)協調會指導原則的公告（2020 年(nián)第 7 号）”。公告明确：本公告發布之日(rì)起 6 個月後（即：2020 年(nián) 7 月 10 日(rì)）開始的藥學研究（以試驗記錄時間點爲準），适用 ICH 指導原則, 其 中包含了 ICH Q5A (R1)和 Q5B。因此，目前人(rén)用單抗、蛋白(bái)藥物等生(shēng)物制品的病毒清除驗證國(guó)内外适用一套标準和原則，建議(yì)的驗證方案 （CHO 表達系統）如(rú)下表所示：
表 2 目前建議(yì)的IND和BLA申報所需病毒清除工(gōng)藝驗證總體(tǐ)方案
|
工(gōng)藝 |
臨床Ι期（IND）
NMPA/EMA/UDFDA
|
臨床Ⅲ期後報産（BLA）
NMPA/EMA/UDFDA
|
|
低 pH 孵育或 S/D 處理(lǐ) |
1種病毒（MuLV），重複2次實驗 |
2 種病毒（MuLV，PRV），重複2次實驗 |
|
納米膜過濾 |
2種病毒（MuLV，MVM），重複2次實驗 |
4 種病毒（MuLV，PRV，Reo3，MVM），重複2次實驗 |
|
陰離(lí)子交換層析 |
2種病毒（MuLV，MVM），重複2次實驗 |
4 種病毒（MuLV，PRV，Reo3，MVM），重複2次實驗，需評估舊填料的病毒清除能力以及病毒殘留 |
|
另外一種層析 |
可(kě)選 |
4 種病毒（MuLV，PRV，Reo3，MVM），重複2次實驗，需評估舊填料的病毒清除能力以及病毒殘留 |
病毒清除工(gōng)藝驗證案例展示
珈創生(shēng)物已爲數百家國(guó)内外生(shēng)物企業提供專業，全面合理(lǐ)的病毒清除工(gōng)藝驗證服務；評審通過率爲100%；有專業PM及時響應客戶需求，跟蹤項目進度，服務貫穿申報全程，提供合理(lǐ)化申報材料書(shū)寫建議(yì)等。
申報階段：IND
申報對象：國(guó)内外雙申報
工(gōng)藝及結果：
|
工(gōng)藝步驟 |
去(qù)除/滅活指數（log10） |
||
|
X-MuLv |
MVM |
PRV |
|
|
低pH孵育 |
≥4.30±0.14 |
/ |
≥5.20±0.07 |
|
陰離(lí)子層析 |
≥5.05±0.00 |
≥5.9±0.35 |
/ |
|
納米膜過濾 |
≥4.85±0.07 |
≥5.15±0.07 |
/ |
申報階段：BLA
申報對象：國(guó)内申報
工(gōng)藝及結果：
|
工(gōng)藝步驟 |
去(qù)除/滅活指數（log10） |
||||
|
X-MuLv |
MVM |
PRV |
Reo3 |
||
|
低pH孵育 |
≥5.80±0.28 |
/ |
≥5.15±0.07 |
/ |
|
|
納米膜過濾 |
≥4.95±0.00 |
≥4.55±0.00 |
≥4.30±0.14 |
≥4.15±0.07 |
|
|
親和層析 |
新填料 |
3.38±0.07 |
3.14±0.38 |
4.09±0.14 |
2.43±0.20 |
|
舊填料 |
3.48±0.07 |
3.14±0.38 |
4.09±0.51 |
2.29±0.16 |
|
|
陰離(lí)子層析 |
新填料 |
4.30±0.00 |
4.19±0.07 |
4.70±0.07 |
4.64±0.07 |
|
舊填料 |
4.35±0.00 |
4.33±0.10 |
4.66±0.29 |
4.50±0.14 |
|
